分會

第二十七分會：色譜分離分析

摘要

β-淀粉樣肽(β-Amyloid, Aβ)是由淀粉樣蛋白前體序列斷裂形成的一種未確定功能的跨膜蛋白。主要有Aβ1-40和Aβ1-42兩種結(jié)構(gòu)形式，其中Aβ1-42是老年斑的主要成分，具有較強的神經(jīng)毒性及聚集性，是阿爾茲海默癥(AD)患者腦內(nèi)Aβ主要的類型[1]。 將Aβ1-42淀粉樣多肽通過EDC與PEI修飾的磁性納米粒子進行偶聯(lián)，得到新型基于Aβ1-42的復合材料，Aβ1-42@MNP。采用FT-IR、Raman、SEM、TEM等技術(shù)對該復合物進行表征，證明成功將Aβ1-42偶聯(lián)在磁性納米材料表面。利用Aβ1-42與糖蛋白潛在的識別作用[2]，將Aβ1-42@MNP作為吸附劑對糖蛋白進行分離純化的研究。在pH4.0的條件下，對100 μg mL-1的卵清蛋白的吸附效率為98.4%，最大吸附容量為347.2 mg g-1；在pH4.0 200 mmol L-1 NaCl的條件下，對卵清蛋白和伴清蛋白的吸附效率分別為96.9%和60.0%，而其他非糖蛋白的吸附效率都在10%以下。因此建立了Aβ1-42@MNP在雞蛋清溶液中高豐度卵清蛋白去除和糖蛋白分離鑒定的新方法。SDS-PAGE結(jié)果表明，Aβ1-42@MNP可有效的去除雞蛋清中的卵清蛋白，并且將其他糖蛋百分離純化出來，經(jīng)質(zhì)譜鑒定，去除高豐度蛋白質(zhì)后，OVA的含量由32.93%降低到11.05%，經(jīng)再次提純，未除去的OVA和OVT等糖蛋白被純化出來。相比于直接鑒定雞蛋清蛋白樣品，利用該方法另有其他35種低豐度蛋白被鑒定出來，其中DH結(jié)構(gòu)域蛋白被大量純化出來，占純化出蛋白含量的60.38%，說明Aβ1-42與DH結(jié)構(gòu)域蛋白有潛在的相互作用，本實驗的研究結(jié)果可為阿爾茲海默癥的致病機制提供理論支持。

關(guān)鍵詞

淀粉樣多肽(Aβ1-42);磁性納米粒子;糖蛋白;分離純化;固相萃取

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