分會

第五分會：生物分析化學(xué)

摘要

MicroRNAs (miRNAs) 是一類小非編碼RNA,對于基因表達(dá)中轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)起到關(guān)鍵作用，以其為生物標(biāo)志物的癌癥和病毒感染治療已取得顯著成果。然而，由于疾病相關(guān)的miRNA調(diào)控機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)有用于miRNA檢測成像的方法信噪比低，通用性差，成像通道單一，因此開發(fā)具有高靈敏度和優(yōu)異選擇性的miRNA正交雙色成像方法對于進(jìn)一步理解活細(xì)胞內(nèi)miRNA功能具有重要價(jià)值。在這里，我們以點(diǎn)亮型RNA適配體作為成像標(biāo)簽，從適配體篩選源頭設(shè)計(jì)miRNA傳感器。我們以Pepper適配體的促穩(wěn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)作為開關(guān)引入miRNA互補(bǔ)序列成功構(gòu)建了傳感模塊，傳感模塊無需復(fù)雜的優(yōu)化，信噪比到達(dá)70倍，可以實(shí)現(xiàn)對多目標(biāo)物（miR-21與miR-122）的高靈敏檢測,檢測線為0.48和0.2 nM，而且傳感模塊可以通過多步串列進(jìn)一步放大檢測信噪比。由于傳感模塊設(shè)計(jì)原理具有普適性，我們進(jìn)一步構(gòu)建了Squash-miRNA響應(yīng)元件。隨后我們選取紅光通道的Pepper-HBC620與綠光通道的Squash-DFHBI-1T成像標(biāo)簽構(gòu)建為正交雙色miRNA成像平臺，并成功實(shí)現(xiàn)了不同miRNA的區(qū)分，既，當(dāng)存在miR-21時(shí)，Squash-DFHBI-1T恢復(fù)結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)綠色熒光，當(dāng)存在miR-122時(shí)，Pepper-HBC 620紅色熒光被點(diǎn)亮。結(jié)果表明我們的miRNA正交雙色成像平臺有望作為研究活細(xì)胞內(nèi)RNA復(fù)雜功能的有利工具。

關(guān)鍵詞

MicroRNA;正交成像;點(diǎn)亮型熒光RNA

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