分會(huì)

第五分會(huì)：生物分析化學(xué)

摘要

細(xì)胞膜蛋白是結(jié)合或整合在細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)上，直接介導(dǎo)細(xì)胞與周圍環(huán)境通訊并參與調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的蛋白總和。在腫瘤研究中，膜蛋白經(jīng)常作為腫瘤檢測(cè)標(biāo)志物和藥物胞內(nèi)遞送的關(guān)鍵介導(dǎo)分子，具有重要的價(jià)值。然而，因其組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜、作用機(jī)制多樣，并且通常與細(xì)胞膜及細(xì)胞膜上的其他分子具有高度復(fù)雜的相互作用，因此具有極高的研究難度。 本實(shí)驗(yàn)室前期通過整合人工堿基的核酸適體細(xì)胞篩選AEGIS-Cell-SELEX技術(shù)，獲得了包含人工堿基的能夠特異識(shí)別肝癌細(xì)胞的核酸適體LZH8和LZH5B [1]。其中，LZH8被發(fā)現(xiàn)能夠特異性識(shí)別肝癌細(xì)胞來源的外泌體，在過去幾年中被廣泛用于各種腫瘤外泌體檢測(cè)方法的研究中[2-4]。而LZH5B被發(fā)現(xiàn)可以通過分子識(shí)別介導(dǎo)納米藥物遞送載體進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮功能[5]。兩種核酸適體均被認(rèn)為在腫瘤檢測(cè)和治療領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用潛力。然而，一直以來含人工堿基的核酸適體LZH8和LZH5B分子識(shí)別的蛋白靶點(diǎn)并不明確，導(dǎo)致進(jìn)一步的腫瘤相關(guān)標(biāo)志物確證和機(jī)制研究無法開展。 本研究利用Biotin修飾的核酸適體LZH8和LZH5B分別進(jìn)行了靶蛋白Pull-down實(shí)驗(yàn)。在核酸適體LZH8的靶蛋白Pull-down實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)?5kDa左右發(fā)現(xiàn)了LZH8特異性條帶，并用蛋白質(zhì)譜進(jìn)行了鑒定。隨后利用基因過表達(dá)實(shí)驗(yàn)，以及蛋白與核酸分子相互作用實(shí)驗(yàn)（如，生物膜干涉BLI）、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等初步驗(yàn)證了LZH8的靶蛋白為熱休克蛋白家族的糖調(diào)節(jié)蛋白GRP78。在核酸適體LZH5B的靶蛋白Pull-down實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)?5kDa以及70kDa左右發(fā)現(xiàn)了兩條LZH5B特異性條帶，并用蛋白質(zhì)譜進(jìn)行了鑒定。隨后利用siRNA實(shí)驗(yàn)，Pull-down之后的Western blotting實(shí)驗(yàn)，以及蛋白與核酸分子相互作用實(shí)驗(yàn)（如，BLI）等驗(yàn)證了LZH5B的靶蛋白為XRCC5（82kDa）。70kDa左右的特異性條帶為XRCC5的異質(zhì)二聚體XRCC6。 后期實(shí)驗(yàn)中，本研究將利用LZH8能夠特異性結(jié)合腫瘤外泌體的特點(diǎn)，以及腫瘤外泌體參與腫瘤發(fā)生發(fā)展，可作為腫瘤液體活檢重要靶標(biāo)的優(yōu)勢(shì)，利用LZH8進(jìn)行臨床樣本的檢測(cè)，以進(jìn)行癌癥非創(chuàng)傷性診斷。本研究將利用LZH5B在藥物遞送[5]方面的優(yōu)勢(shì)，進(jìn)行核酸適體LZH5B的藥物遞送機(jī)制與靶蛋白XRCC5相關(guān)的內(nèi)容。

關(guān)鍵詞

人工堿基;核酸適體;靶點(diǎn)確證;生物標(biāo)志物;藥物遞送

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