分會(huì)

第三十二分會(huì)：化學(xué)生物學(xué)

摘要

O-連接N-乙酰氨基葡萄糖（O-linked β-N-acetylglucosamine, O-GlcNAc）糖基化是一種常見(jiàn)的蛋白翻譯后修飾，在細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄翻譯、基因表達(dá)、生長(zhǎng)分化、免疫保護(hù)等過(guò)程中起著重要的作用。O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶（O-GlcNAc transferase, OGT）是人體細(xì)胞內(nèi)調(diào)控O-GlcNAc糖基化水平的關(guān)鍵酶蛋白之一。開(kāi)發(fā)強(qiáng)效、專(zhuān)一的OGT抑制劑是研究OGT 糖基轉(zhuǎn)移酶生物學(xué)功能的重要工具，也對(duì)研發(fā)O-GlcNAc糖基化相關(guān)疾病的藥物具有重要意義。項(xiàng)目組發(fā)展了一個(gè)基于牛血清蛋白熒光偏振標(biāo)簽（FP-Tag）的OGT高通量活性測(cè)試方案。該方案利用OGT將糖基供體上疊氮修飾的N-乙酰氨基葡萄糖基連接到熒光基團(tuán)修飾的多肽受體上，再通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)將糖受體連接到二苯并環(huán)辛炔（DBCO）修飾的大分子牛血清蛋白上，利用大分子蛋白在溶液中轉(zhuǎn)動(dòng)緩慢的性質(zhì)，將其作為一個(gè)可以引起偏振信號(hào)增強(qiáng)的“FP-tag”，從而直觀的顯示出OGT的酶活性。該方案以經(jīng)濟(jì)、易得的牛血清蛋白作為“FP-tag”，具有篩選成本低、通量高等有優(yōu)點(diǎn)，適用于OGT催化活力的高通量測(cè)試，也可用于OGT抑制劑的大規(guī)模篩選。我們利用該方案篩選了一個(gè)海洋天然產(chǎn)物化合物庫(kù)，獲得多個(gè)IC50為?M級(jí)的OGT抑制劑。

關(guān)鍵詞

O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶;抑制劑;高通量篩選;熒光偏振;海洋天然產(chǎn)物

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