分會

第七分會：生物標(biāo)記與分析

摘要

原核生物Agonaute（pAgo）蛋白是一類由核酸介導(dǎo)的可編程性核酸內(nèi)切酶，通常以短的單鏈DNA（ssDNA）為引導(dǎo)鏈（gDNA），靶向識別并剪切DNA[1-3]。pAgo具有單堿基分辨力的精準(zhǔn)特異性、結(jié)合核酸活性、多周轉(zhuǎn)高效剪切活性、靈活的靶向設(shè)計等眾多顯著優(yōu)勢，為核酸分析技術(shù)的發(fā)展提供了契機[4]。本研究以腫瘤miRNA為檢測對象，以核酸擴增技術(shù)為基礎(chǔ)，以pAgo為核酸檢測工具，利用TtAgo可編程性剪切功能，發(fā)展了雙重信號放大、多重檢測策略。本研究提出了基于可編程性TtAgo的腫瘤多重miRNA檢測平臺（TEAM）。TEAM方法以EXPAR產(chǎn)生的大量擴增子為gDNA，指導(dǎo)TtAgo高效、精準(zhǔn)地剪切探針，從而實現(xiàn)雙重信號放大檢測miRNA。TEAM方法在10-8 M到10-18 M濃度范圍內(nèi)展現(xiàn)出很好的線性關(guān)系，雙重信號放大策略使其檢測限達(dá)到1 aM。利用TtAgo的可編程性并設(shè)計不同通道的熒光探針，實現(xiàn)了四重miRNA的同步檢測和高度同源性的miRNA家族成員的精準(zhǔn)分型。進(jìn)一步評估了該方法的臨床應(yīng)用潛力，有望促進(jìn)核酸分析技術(shù)的發(fā)展，推動其在腫瘤臨床診斷中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞

原核生物Argonaute;；腫瘤miRNA;多重檢測

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